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单细胞免疫组学服务

我们提供基于10X Genomics公司单细胞免疫组技术的科研服务，这项技术能够以单细胞分辨率同时研究免疫系统的细胞异质性、T细胞和B细胞组库多样性以及抗原特异性。让科学家既可以通过全转录组分析发现新的细胞类型和状态，又可以采用感兴趣的靶向基因表达基因组合来重点搜索。

一、工作原理

10X Genomics的单细胞免疫组技术中，带核酸标签链的凝胶微珠（Gel bead）是重要的技术核心。每一个凝胶微珠上连着特定的DNA片段，DNA片段由三部分序列组成：Barcode、UMI、TSO。

Barcode序列是16个碱基的长度，一共有400万种Barcode，一个微珠是对应于一种Barcode序列，通过这400万种Barcode序列，可以把凝胶微珠区分开，Barcode的作用是在测序后，区分一条read最初是来自于哪个微液滴。

UMI（Unique Molecular Identifier）是一段随10个碱基长度的随机序列，有100万种序列的变化，每一条DNA标签链都有自己的UMI序列，UMI序列的作用是为了区分一条read最初是来自于哪一个原始的cDNA分子，并进一步区分基因序列重复是duplication还是真实的SNP，或是PCR产生的突变。

TSO序列是起到与逆转录出来的第一条cDNA粘合的作用，并起动第二条cDNA链的复制。

用10X Genomics公司的Chromium把分散成单细胞的悬液与凝胶微珠通过微流控，与油相混合在一起，形成油包水的小微滴。

接下来把细胞膜破掉，让细胞当中的mRNA游离出来。游离出来的mRNA与小液滴中的水相混合，也就与水相中的逆转录酶、结合在凝胶微珠上的核酸标签链引物、以及dNTP底物相接触。

接着，发生逆转录反应，mRNA在Poly(dT)的引导下逆转录出第一链的cDNA，第一链的cDNA会在3’端的最末端被逆转录酶加上3个C碱基。这3个C碱基会与TSO序列末端的3个G碱基发生互补，接着TSO序列延着第1条cDNA复制出第2条cDNA链。

然后，用PCR扩增出带了标签序列全长的cDNA序列。

得到全长的cDNA序列后，用针对VDJ边上保守序列的引物，配合上游引物，扩增出带了标签序列，又同时能测到VDJ序列的文库。

VDJ文库

全转录组文库

二、技术亮点

1、通过在mRNA的5’端添加条形码，在单细胞水平上分析数千个基因，实现细胞类型和细胞状态的无偏鉴定

2、同时分析同一细胞中的免疫组库（BCR/TCR）和基因表达，以便将克隆型与对应的细胞亚型相关联

3、以完整的同种型分辨率获得T细胞和/或B细胞的全长配对受体序列，为抗体和TCR发现提供功能数据

4、将基因表达分析与数百个细胞表面蛋白的高分辨率检测相结合，实现超多参数的多组学细胞分析

5、与靶向基因表达基因组合相结合，研究人员能够关注最重要的基因，并加速研究以取得可行动的见解

6、采用Feature Barcode技术的兼容产品（寡核苷酸偶联抗体、寡核苷酸偶联MHC）轻松开展多组学分析

7、双索引文库带来出色的测序数据质量